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產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST

DNA Marker 2000 plus

簡要描述:

DNA Marker 2000 plus公司正在出售的產(chǎn)品:分泌A2抗體B淋巴細(xì)胞 脂質(zhì)運載蛋白相互作用膜受體蛋白封閉多肽 麥芽香肉桿菌PCR檢測試劑盒 大鼠絨毛膜促性腺激(CG)ELISA Kit 麥芽糖含量活性比色法檢測試劑盒 脫色芽孢桿菌 肌細(xì)胞增強因子2B抗體

更新時間:2024-01-12

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DNA Marker 2000 plus

公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

A-PJ1066

DNA Marker 2000 plus

250μl

A-PJ1066

DNA Marker 2000 plus

250μl×10

DNA Marker 2000 是由 6 條帶狀雙鏈 DNA 條帶組成, 分別為:100、250、500、750、1000 和 2000 bp,每條帶 濃度大約為 20 ng/μl;適用于瓊脂糖凝膠電泳中 DNA 條帶 的分析。本產(chǎn)品為即用型產(chǎn)品,已含有 loading Buffer,可 根據(jù)試驗需要,直接取 5 μl 進(jìn)行電泳,使用方便,條帶清晰。

包裝


應(yīng)用:適用于衡量 100-2000bp 之間 PCR 片段的大小。
儲存液組分:
10mM Tris-HCl(pH8.4)
10mM EDTA
0.02%溴酚藍(lán)
5%甘油
儲存:-20℃可保存 2 年,避免反復(fù)凍融。
使用方法
1.取 5 μl 本產(chǎn)品加入到瓊脂糖凝膠的加樣孔中(每 1mm 加樣孔寬度加 1μl,如加樣孔較寬,可適當(dāng)增加上樣量)進(jìn)行電泳。
2.建議濃度為 1.5%-2%的瓊脂糖凝膠,電泳電壓為 4-10v/cm,電泳時間為 30-40 分鐘。
3.通過 EB 染色,在紫外燈下觀察電泳條帶。

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PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備?

試劑:
模板DNA:PCR反應(yīng)需要模板DNA,如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等;引物:PCR反應(yīng)的兩個引物,分別與模板DNA的兩端配對擴(kuò)增所需的特定區(qū)域,引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物;dNTPs:PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細(xì)胞分裂、DNA合成等生物學(xué)過程,用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增;Taq DNA聚合酶:PCR反應(yīng)需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴(kuò)增DNA鏈;PCR buffer溶液:對PCR反應(yīng)具有緩沖作用,調(diào)節(jié)反應(yīng)pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛,可增強PCR反應(yīng)特異性,從而提高反應(yīng)效率;酶切體系:PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實驗步驟,常常需要進(jìn)行酶切操作。MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn),用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物;
設(shè)備:
PCR儀:用于控制反應(yīng)溫度,保證PCR反應(yīng)時不同溫度環(huán)節(jié)的嚴(yán)格控制;電泳槽:用于分離PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;核酸提取儀:從組織樣本中全自動提取核酸。  這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是,只有在有序齊全的基礎(chǔ)上,才能進(jìn)行PCR反應(yīng)并得出準(zhǔn)確結(jié)果。

PCR相關(guān)基礎(chǔ)實驗:

PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)由20到35個循環(huán)組成,每個循環(huán)包括以下3個步驟:

一、變性:

利用高溫(93-98℃)使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環(huán)之前,通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離,僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘,接下來PCR儀就控制溫度進(jìn)入循環(huán)階段。

二、退火或稱接合,復(fù)性:

在DNA雙鏈分離后,降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點5℃。錯誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯誤地結(jié)合。該步驟時間1-2分鐘。

三、延伸:

DNA聚合酶由降溫時結(jié)合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統(tǒng)的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr(來自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40秒、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

PCR反應(yīng)條件優(yōu)化:

1、變性溫度和時間:

保證模板DNA解鏈?zhǔn)潜WC整個PCR擴(kuò)增成功的關(guān)鍵。加熱90~95°C, 30~60s,再復(fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續(xù)時間過長,可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

2、復(fù)性溫度和時間:

PCR擴(kuò)增特異性取決于復(fù)性過程中引物與模板的結(jié)合。復(fù)性溫度越高,產(chǎn)物特異性越高。復(fù)性溫度越低,產(chǎn)物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定。

3、延伸溫度和時間:

一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時,過高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合,可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應(yīng)時間,可根據(jù)待擴(kuò)增片段的長度而定,小于1kb, 1min足夠;大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時間。這里需要注意,延伸時間過長可能出現(xiàn)非特異擴(kuò)增。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時間。

4、循環(huán)數(shù):

其他參數(shù)選定后,PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環(huán)后,PCR產(chǎn)物的積累即可達(dá)到最大值,實際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達(dá)到100%,因此不管模板濃度是多少,20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多,非特異擴(kuò)增增加。

公司正在出售的產(chǎn)品:

幼蟲芽胞桿菌(美洲蜂幼蟲腐臭病)染料法熒光定量PCR試劑盒

瘢痕性天皰瘡抗體ELISA試劑盒 CP免費代測試劑

人皰疹病毒通用探針法熒光定量PCR試劑盒

點狀古柏線蟲PCR檢測試劑盒供應(yīng)

單酰甘油-O-?;D(zhuǎn)移3ELISA試劑盒 MOGAT3免費代測試劑

發(fā)酵支原體PCR檢測試劑盒直銷

馬傳染性貧血(EIAV)核檢測試劑盒

細(xì)胞周期L2ELISA試劑盒

馬皮疽組織胞漿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

壞死梭桿菌PCR檢測試劑盒

蛋白C抑制因子ELISA試劑盒

馬生殖泰勒氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒

馬生殖泰勒氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒

地松誘導(dǎo)蛋白ELISA試劑盒

腦多頭囊蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

腔闊盤吸蟲染料法熒光定量PCR試劑盒

動力蛋白激活蛋白4ELISA試劑盒

鼻疽伯克霍爾德菌(BM)核檢測試劑盒

侵肺巴斯德菌PCR檢測試劑盒

多聚ADP核糖聚合4ELISA試劑盒

腔闊盤吸蟲染料法熒光定量PCR試劑盒

馬皮疽組織胞漿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

多藥耐藥相關(guān)蛋白ELISA試劑盒

鐮刀瘧原蟲(惡性瘧原蟲)探針法熒光定量PCR試劑盒

馬皰疹病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒

二肽2ELISA試劑盒

牛腺病毒3型探針法熒光定量PCR試劑盒

氣腫疽梭狀桿菌PCR檢測試劑盒

防御β118ELISA試劑盒

馬皰疹病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒

鐮刀瘧原蟲惡性瘧原蟲PCR檢測試劑盒供應(yīng)

人丁酰酯(BCHE)試劑盒ELISA

氣腫疽梭狀桿菌PCR檢測試劑盒

牛腺病毒3型 探針法熒光定量PCR 試劑盒

人蛋白3特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體(PR3-ANCA)elisa試劑盒

藍(lán)氏賈第鞭毛蟲A型探針法熒光定量PCR試劑盒

腸桿菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒(暫停)

DNA Marker 2000 plus人層粘連蛋白-5(LN-5)ELISA檢測試劑盒

鵪鶉支氣管炎病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

小鼠肝炎病毒PCR檢測試劑盒

β2糖蛋白1抗體IgA(β2-GP1 Ab IgA)試劑盒ELISA

鴨腸炎病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

傳染性造血器官壞死病毒(IHNV)核檢測試劑盒

人成纖維細(xì)胞生長因子6(FGF6)ELISA試劑盒

侵肺巴斯德菌PCR檢測試劑盒

 


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